酶標儀的操作使用

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

酶標儀即酶聯(lián)檢測儀是酶聯(lián)吸附試驗的專(zhuān)用儀器又稱(chēng)微孔板檢測器?？珊?jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類(lèi)，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個(gè)比色計,即用比色法來(lái)進(jìn)行分析。盡管酶標儀的發(fā)展極為快速，種類(lèi)繁多，功能也不斷加強，但其根本的功用是不變的，即比色測定。

酶標儀的操作使用

一、測定波長(cháng)

目前國內常見(jiàn)的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過(guò)氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波長(cháng)處有大吸收，當pH值降為L(cháng)0時(shí)，大吸收波長(cháng)移至492nm,同時(shí)摩爾消光系數變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(cháng)450nm處有大消光系數，如果HRP量少，H:O:和TMB過(guò)量時(shí)，則形成藍色的陽(yáng)離子根。降低pH,即可使藍色的陽(yáng)離子根轉變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩定90min。因此，450nm和492nm兩個(gè)波長(cháng)是目前ELISA測定常用的。

酶標儀有單波長(cháng)和雙波長(cháng)檢測功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(cháng)檢測。所謂的“單波長(cháng)"就是使用一種對顯色具大吸收的波長(cháng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測定；而“雙波長(cháng)"則除了用對顯色具大吸收的波長(cháng)即450nm或492nm進(jìn)行比色測定外，同時(shí)用對特異顯色不敏感的波長(cháng)如630nm進(jìn)行測定，酶標儀后打印出來(lái)的吸光度則為二者之差。630nm波長(cháng)下得到的吸光度是非特異的，來(lái)自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測定中，好使用雙波長(cháng)，且不必設空白孔。

二、測定的吸光度范圍

通常，酶標儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿(mǎn)足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線(xiàn)性。

三、光學(xué)系統

酶標儀的光學(xué)系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個(gè)參比通道，每次測定可進(jìn)行自我校準。酶標儀的光學(xué)系統功能如何，均可通過(guò)酶標儀測定的吸光度范圍、線(xiàn)性度、精密度和準確度等體現出來(lái)。光學(xué)系統好的話(huà)，則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

四、檢測速度

酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時(shí)間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過(guò)程中，因測定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。

五、震板功能

酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻，使板孔內顏色均一。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節。使用有震板功能的酶標儀，在進(jìn)行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑后，可不必振蕩混勻，直接放人酶標儀上測定即可。

六、溫育功能

溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動(dòng)地控制儀器內部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過(guò)程可在儀器內部完成，而無(wú)需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標儀具有此種功能。

七、軟件功能

軟件功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動(dòng)力學(xué)、紫外和凝集等數據的統計分析并報告結果的功能。軟件功能是中上等酶標儀的一個(gè)非常重要的功能。如果硬件方面區別不大，則軟件就成為判定酶標儀優(yōu)劣的惟一指標。對于用戶(hù)來(lái)說(shuō)，好的軟件功能，對實(shí)際工作會(huì )有較大的幫助。ELISA定性測定，酶標儀如具有陽(yáng)性判斷值(cut-off)及其測定“灰區"(即指測定吸光度處于cut-off周?chē)囊欢▍^域，此區域內結果應為“可疑")的統計計算功能，不但方便了實(shí)驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有很高的實(shí)用價(jià)值。有研究表明，四參數方程能較好地反映測定的劑量反應曲線(xiàn)，適合于定量酶測定的曲線(xiàn)擬合。因此，如目的是定量測定，則在酶標儀的軟件功能中，要有這種曲線(xiàn)回歸方程計算分析功能。其他諸如連點(diǎn)、直線(xiàn)等回歸計算，則可根據酶標儀的應用目的而定，如兼用于微量生化測定，則此類(lèi)回歸計算就很有必要。

八、語(yǔ)言界面

通常進(jìn)口的中上等酶標儀人機對話(huà)多采用英文。這對于某些基層實(shí)驗室可能會(huì )存在語(yǔ)言方面的困難，從而難以限度地發(fā)揮酶標儀的作用。為解決這方面的問(wèn)題，已有一些酶標儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實(shí)驗室技術(shù)人員的使用。